方法快讯 | 体外磷酸盐结合研究评价方法及要点

  高磷血症主要发生在慢性肾病患者中，醋酸钙片、碳酸镧咀嚼片/颗粒、碳酸司维拉姆片/干混悬剂、枸橼酸铁片等，是目前治疗高磷血症的局部胃肠道作用的一线药物，该类药物通过在肠道内与磷结合形成沉淀，减少磷的吸收以降低体内的血磷水平。
  根据FDA个药指南及CDE（国家药品监督管理局药品审评中心）建议，需进行体外溶出研究、磷酸盐动力学结合研究和磷酸盐平衡结合研究，以及体内临床药效终点研究，来评价受试制剂和参比制剂生物等效性研究。
  截至目前醋酸钙、碳酸镧咀嚼片或颗粒、碳酸司维拉姆干混悬剂国内已有多个厂家通过一致性评价，但枸橼酸铁片目前国内还未有仿制药上市。该品种体外磷结合等效性评价的方法是非常关键的部分，但该研究具体有哪些挑战及关键注意事项？本文将结合指导原则要求与我司前期经验进行具体讨论与分析。
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  一、体外磷酸盐结合等效性评价标准
  FDA及CDE颁布的指导原则中，不同磷结合剂的体外等效性评价标准汇总如下：
  二、体外磷结合等效性挑战
  ▍复杂代谢路径
  枸橼酸铁在胃肠道中主要通过局部结合磷酸盐发挥作用，而非系统性吸收，传统血药浓度检测方法难以直接评估其生物等效性。
  ▍替代指标选择
  需依赖体外磷酸盐结合能力、铁释放速率等替代参数，结合临床终点（如血磷下降幅度、铁代谢指标）进行综合判断。
  ▍方法学局限性
  体外试验无法完全模拟人体胃肠环境（如pH波动、食物成分干扰），需通过多批次重复试验和交叉验证提高数据可靠性（要求至少n=12）。
  ▍支持监管申报
  FDA和EMA、NMPA均要求提交体外结合试验数据作为仿制药开发的必要证据，以证明与原研药的理化特性一致。
  三、实验设计研究要点
  ▍磷酸盐浓度
  结合试验应至少包含8个不同的磷酸盐浓度，包括达到结合平台的最高磷酸盐浓度，约最高磷酸盐浓度1/10的最低磷酸盐浓度，以及介于最高和最低之间的其余磷酸盐浓度。
  ▍磷酸盐动力学结合研究测定时间点
  每个条件下应在24 h内选择至少8个时间点。需特别注意达到平台期前的时间点不能太少，以反映受试制剂和参比制剂动力学变化趋势。
  ▍磷酸盐平衡结合研究浓度和孵育时间
  平衡研究磷酸盐的浓度需结合正常体内每天摄入磷酸盐量，制剂规格，溶液体积等综合评定。孵育时间根据动力学达到稳态的时间进行合理选择。
  ▍pH监控
  对于动力学和平衡试验都需要提供详细的pH监控方法、记录、间隔时间等。
  四、实验设计研究要点
  重点参考中国药典9012《生物样品定量分析方法验证指导原则》，需要考察系统适用性、定量限、准确度、精密度、稀释可靠性、耐用性、残留、基质效应、膜吸附、稳定性等，以验证方法准确可靠。
  干扰考察：如加入了BES等pH稳定剂来配制磷酸盐，还需要考察BES对磷酸盐结合的影响，另外还需要考察辅料、原料药、空白制剂对磷酸盐检测的干扰。
  建议进行ISR研究，以考察方法的准确性。
  所有资料都需要按照等效性评价相关要求提供，如制剂来源、质检报告，分析计划、分析报告、进样序列表、标曲质控汇总表等。
  五、体外磷结合药动学及平衡研究曲线
  图1碳酸镧在pH3.0的40mM磷酸盐体系中动力学结合曲线
  图2枸橼酸铁在pH3.0和pH 7.5 40mM磷酸盐体系中动力学结合曲线
  图3枸橼酸铁在不同浓度的磷酸盐平衡研究中Langmuir线性方程
  六、体外磷结合研究其他应用
  除了抗高磷血症药物外，对于可能导致低磷血症的补铁剂（如蔗糖铁、羧基麦芽糖铁），也可以通过体外磷结果试验评估药物与磷酸根的结合能力，从而预测其在体内引起低磷血症的风险，为临床用药提供安全性依据。
  湖南科锐斯医药的磷酸盐动力学和磷酸盐平衡结合研究平台，已成功开发了碳酸镧咀嚼片、枸橼酸铁片分析方法，并已经助力客户完成该品种体外磷酸盐等效性评价研究。
  项目经验：目前已完成近500个品种的生物样本检测，接受国家局现场核查20余次，50+个品种获得免核查。
  专业团队：以高级工程师领衔的核心骨干团队成员56人，本科及以上比例100%，硕士及以上占比41%。
  质量体系：取得中国合格评定国家认可委员会（CNAS）实验室认可证书。实验过程采用电子化信息系（LIMS）统进行全流程的记录管理和生物样本管理，并建立了满足中美双报的中英文体系。
  特色品种：
  外用制剂：洛索洛芬钠凝胶贴膏、丙酸氟替卡松乳膏等
  复方制剂：复方甘草酸苷等
  内源性物质：熊去氧胆酸、二十碳五烯酸等
  体外磷结合剂：枸橼酸铁等